Diagnostic moléculaire de la présence de mildiou (Plasmopara halstedii) dans les semences de tournesol

Molecular diagnosis of mildew (Plasmopara halstedii) infection in sunflower seeds

UMR Inra-UBP Amélioration et Santé des plantes ,24, avenue des Landais, 63177 Aubière Cedex, France

Résumé

Le mildiou du tournesol, causé par l’oomycète Plasmopara halstedii, est une maladie potentiellement dévastatrice et économiquement importante. Du fait du risque de propagation de la maladie par les semences infectées et de l’observation croissante de l’apparition d’isolats résistants au métalaxyl, il est apparu nécessaire de mettre au point une méthode de détection du parasite dans les graines ou les tissus de la plante. Nous avons donc développé un test moléculaire pour le diagnostic de la présence du mildiou dans les semences. Plusieurs méthodes d’extraction ont été comparées pour améliorer le rendement et la qualité de l’ADN du parasite présent en faible quantité. Des échantillons de graines contaminées entières et décortiquées ont été analysés par PCR, avec des amorces spécifiques de Plasmopara halstedii. L’ADN de l’agent pathogène est toujours détecté, notamment dans les coques. Ces données sont importantes pour le développement d’un kit de diagnostic.

Abstract

Sunflower downy mildew, caused by the fungus Plasmopara halstedii, is a potentially devastating disease with important economical implications. Because of the risk of propagation of the disease by infected seeds and of the regular observation of metalaxyl-resistant isolates of the fungus, there is a greater need for efficient method to detect the fungus in seed or plant tissue. Therefore, we develop-ed a molecular test to show the presence of sunflower downy mildew in seed samples. Several extraction methods were compared to improve quality and yield of the scanty DNA of the fungus. Both whole and hulled seeds of contaminated samples were analysed by PCR, using Plasmopara halstedii specific primers. We demonstrated that DNA of the pathogen is always detected, notably in the shell fraction. These data are important for the development of a diagnostic kit.