Issue |
OCL
Volume 23, Number 1, January-February 2016
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Article Number | D117 | |
Number of page(s) | 8 | |
Section | Dossier: Lipids and Brain / Lipides et cerveau | |
DOI | https://doi.org/10.1051/ocl/2015068 | |
Published online | 26 January 2016 |
Research Article
Selective comparison of gelling agents as neural cell culture matrices for long-term microelectrode array electrophysiology
Comparaison sélective d’agents gélifiants utilisés en tant matrices de cultures de cellules neurales en 3 dimensions pour une approche à long terme d’électrophysiologie
1
Italian Institute of Technology (IIT), Dept. of Neuroscience and Brain Technologies
(NBT),
via Morego 30, 16163
Genoa,
Italy
2
Dept. of Informatics and Microsystem Technology, University of
Applied Sciences Kaiserslautern, Amerikastraße 1, 66482
Zweibrücken,
Germany
3
Dept. of Bioengineering, University of Pittsburgh,
3501 Fifth Avenue, Pittsburgh, PA
15260,
USA
4
David Geffen School of Medicine at UCLA,
Dept. of Neurology, 635 Charles E.
Young, Los Angeles,
CA
90095,
USA
* Correspondence: axel.blau@iit.it
Received:
23
September
2015
Accepted:
9
October
2015
In classic monolayer cell culture, the world is flat. In contrast, tissue-embedded cells experience a three-dimensional context to interact with. We assessed a selection of natural gelling agents of non-animal origin (ι- and κ-carrageenan, gellan gum, guar gum, locust bean gum, sodium alginate, tragacanth and xanthan gum) in serum-free medium at 1–4% (w/v) concentration for their suitability as a more natural 3D culture environment for brain-derived cells. Their biophysical properties (viscosity, texture, transparency, gelling propensity) resemble those of the extracellular matrix (ECM). Gels provide the neurons with a 3D scaffold to interact with and allow for an increase of the overall cell density compared to classical monolayer 2D culture. They not only protect neurons in cell culture from shear forces and medium evaporation, but stabilize the microenvironment around them for efficient glial proliferation, tissue-analog neural differentiation and neural communication. We report on their properties (viscosity, transparency), their ease of handling in a cell culture context and their possible use modalities (cell embedment, as a cell cover or as a cell culture substrate). Among the selected gels, guar gum and locust bean gum with intercalated laminin allowed for cortical cell embedment. Neurons plated on and migrating into gellan gum survived and differentiated even without the addition of laminin. Sodium alginate with laminin was a suitable cell cover. Finally, we exemplarily demonstrate how guar gum supported the functional survival of a cortical culture over a period of 79 days in a proof-of-concept long-term microelectrode array (MEA) electrophysiology study.
Résumé
Au contraire de la culture classique pratiquée en monocouche (2D), la culture cellulaire en 3 dimensions (3D) permet de reproduire les interactions entre cellules d’un tissu. Nous avons évalué une sélection d’agents gélifiants naturels d’origine non animale (ι- et κ-carraghénane, gomme gellane, gomme de guar, gomme de caroube, alginate de sodium, gomme adragante et gomme de xanthane) dans un milieu sans sérum à des concentrations de 1–4 % (w/v) au regard de leur aptitude à offrir un milieu de culture 3D plus naturel pour les cellules cérébrales. Les propriétés biophysiques de ces agents (viscosité, texture, transparence, propension de gélification) ressemblent à celles de la matrice extracellulaire. Les gels fournissent aux neurones un assemblage 3D pour interagir et permettre une augmentation de la densité cellulaire globale, comparativement à une culture monocouche 2D classique. Ils protègent non seulement les neurones en culture cellulaire des forces de cisaillement et de l’évaporation moyenne, mais stabilisent également le micro-environnement qui les entoure, assurant ainsi l’efficacité de la prolifération des cellules gliales, de la différenciation et de la communication neuronales. Cet article rapporte donc des données sur leurs propriétés (viscosité, transparence), leur facilité de manipulation en culture cellulaire et leurs modalités d’utilisation possibles (enrobage de la cellule, en tant que couvercle cellulaire ou en tant que substrat de la culture cellulaire). Parmi les gels sélectionnés, la gomme de guar et la gomme de caroube, avec de la laminine intercalée, permettent l’enrobage de cellules corticales. Les neurones étalés et migrant dans la gomme de gellane survivent et se différencient même sans l’addition de laminine. L’alginate de sodium additionné de
laminine forme un couvercle cellulaire approprié. Enfin, nous démontrons de manière univoque comment la gomme de guar a permis la survie d’une culture fonctionnelle corticale sur une période de 79 jours dans le cadre d’une étude de concept d’électrophysiologie à long terme avec une matrice de microélectrodes.
Key words: Microbial-, plant- and algae-derived gelling agents / 3D neural cell culture / microelectrode array electrophysiology
Mots clés : Gélifiants, d’origine microbienne, de plantes et d’algues / culture cellulaire neurale 3D / matrice de microélectrodes d’électrophysiologie
© N. Wilk et al., published by EDP Sciences, 2016
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